Результаты
Выделение губчато-ассоциированных бактерий из 3 разных губок привело к 80 бактериальным изолятам, которые морфологически различны. Девять бактериальных изолятов были получены из губки Hyrtios sp., 20 бактерий, выделенных из Smenospongia sp., И 51 бактерия, выделенная из Verungola sp.
Губчато-ассоциированные бактерии с анти-Vibrio spp свойствами
Двенадцать (15%) из 80 бактериальных изолятов были способны ингибировать рост Vibrio, о чем свидетельствует образование четкой зоны вокруг бактериальной колонии (таблица 1). Один бактериальный штамм (P2.24) может ингибировать три вида Vibrio, включая V. harveyi, V. parahaemolyticus и V. vulnificus. Кроме того, 10 бактериальных штаммов специфически ингибируют только V. harveyi, а 1 штамм (P3.310) может ингибировать как V. harveyi, так и V. parahaemolyticus. Двенадцать бактериальных изолятов имели различный диаметр прозрачной зоны в диапазоне от 0,1 мм до 5 мм. Лучший анти-Vibrio SPP. активность, проявленная штаммом P2.24, из-за его способности ингибировать три вида Vibrio с различным диаметром прозрачной зоны. Чтобы подтвердить его анти-Vibrio spp. активность, концентрированная культура, супернатанты и экстракты метаболитов штамма P2.24 были протестированы в анализе антагонизма.
Гемолитическая реакция потенциальных бактерий
Двенадцать потенциальных штаммов, продуцирующих анти-Vibrio spp. соединения были гемолитическими отрицательными. Они не могут лизировать клетки крови, на что указывает отсутствие чистой зоны вокруг колонии после 24 ч инкубации.
Идентичность гена NRPS-PKS и 16S рРНК выбранных штаммов
Было установлено, что три (P2.24, P3.310, D4.13) из 4 потенциальных штаммов (на основе их способности ингибировать рост sib Vibrio в широких спектрах) имеют гены как NRPS, так и PKS, и один штамм (P2.211) не имеют обоих генов, как показано в таблице 2. Аденилазный (A) домен NRPS и кетосинтазный (KS) домен гена PKS из этих бактерий были амплифицированы методом ПЦР, что привело к ± 1000 п.н. и ± 700 п.н. Фрагмент ДНК соответственно (рис. 1). Выравнивание с использованием BlastN показало, что все гены NRPS и PKS были сходны с генами NRPS и PKS Bacillus spp в различных штаммах. Кроме того, амплификация гена 16S рРНК четырех штаммов привела к фрагменту ± 1300 п.н. Все три штамма были высоко гомологичны с Bacillus spp (таблица 2).
Генетические взаимоотношения для гена NRPS-PKS потенциальных штаммов сравнивали с их относительным геном в базе данных GenBank NCBI и некоторых ссылках путем построения филогенетического дерева. Филогенетическое дерево домена A из гена NRPS и домена KS гена PKS было показано на фиг.2 и фиг.3, соответственно. Эволюционные отношения, основанные на 16S рРНК потенциальных штаммов с их близкородственными штаммами, были выполнены на рисунке 4.
Антибактериальная активность культуры, супернатанта и экстракта штамма P2.24
Бактериальная культура, используемая в этом анализе, содержит приблизительно 7,8 × 107 клеток / мл среды или 1,6 × 107 клеток / 20 мкл. Культура, супернатант, а также экстракт штамма P2.24 неизменно проявляли анти-Vibrio spp. действия, на которые указывает четкое формирование зоны вокруг бумажного диска (Рис.5). Наиболее сильный ингибирующий эффект был продемонстрирован концентрированной культурой штамма P2.24 против V. parahaemolyticus. Чистая зона также выставлялась ампициллином в качестве положительного контроля. Нет чистой зоны, полученной из ДМСО в качестве отрицательного контроля.
Мужчины очень долго правили в индустрии фитнеса. Не удивительно, что женщины в равной конкуренции соревнуются с мужчинами в индустрии фитнеса. Они также ищут идеальное тело,
Есть несколько разных циклов, вокруг которых вращается Земля. Некоторые из циклов были затронуты катастрофой Фукусима-Дайхатсу. Завод в Фукусиме пострадал от землетрясения силой 9,0 балла. Растения,
Этот эксперимент проводится для наблюдения за развитием эмбрионов перепелов в течение нескольких дней. Эмбрион перепела обычно развивается и выводится через 20-21 день. Мы провели эксперимент