Введение
Подвздошная кишка является самым длинным сегментом тонкой кишки и содержит круглый гладкий мышечный слой. Гладкая мышца содержит мускариновые рецепторы ацетилхолина, которые должны реагировать на присутствие ацетилхолина (ACh) и инициировать сокращение мышц (Widmaier et al., 2016). Целью данного практического занятия было изучение влияния увеличения концентрации АЧ на сегмент подвздошной кишки морской свинки. Это было сделано путем расчета ЕС50, который представляет собой согласование агониста, который дает 50% максимального ответа, и Emax, который является максимальным ответом, вызываемым агонистом (Rang et al., 2016). Ожидается, что будет существовать положительная корреляция между концентрацией АЧ и силой сокращения тканей.
Метод
Настроить
Морская свинка была гуманно убита смещением шейки матки, и подвздошная кишка была удалена. Короткий сегмент подвздошной кишки (1 см – 1,5 см) нарезали с каждого конца и устанавливали в баню для органов объемом 38 мл. Ванна для органов, содержащая аэрированный раствор Тирода, и его выдерживали при температуре 36 ° С. Сегмент подвздошной кишки был прикреплен к одному концу рычага, соединенного с изотоническим преобразователем, чтобы напряжение сокращений можно было регистрировать в устройстве сбора данных Powerlab. Вес 1 г был прикреплен к другому концу рычага, чтобы ткань была под напряжением. Добавление ацетилхолина
Был сделан ряд серийных разведений ацетилхолина (ACh) для получения конечных концентраций в ванне для органов в диапазоне от 1 * 10-9 М до 8,192 * 10-6 М. ACh добавляли в 3-минутном цикле доз. Самая низкая концентрация ACh была добавлена в ванну для органов, и реакция ткани наблюдалась в течение 30 секунд. Раствор промывали переливом для удаления АХ. Чтобы уравновесить температуру, ткани давали отдохнуть в течение двух минут. Увеличивающиеся концентрации ACh добавляли в ванну для органов с двукратным приращением, и ответ ткани регистрировали до тех пор, пока не был достигнут максимальный ответ.
Обработка данных
В LabChart была создана трассировка данных. Это использовалось для расчета значения Emax и для расчета максимального отклика в процентах от зарегистрированных напряжений. График максимального процентного ответа по отношению к журналу [ACh (M)] был создан в Microsoft Excel. Из графика было рассчитано значение EC50.
Результаты
Рисунок 1: График, показывающий реакцию короткого сегмента подвздошной кишки морской свинки на повышение концентрации ацетилхолина. Данные выражены в процентах от максимального отклика, записанного в милливольтах. График показывает значение EC50 3,98 * 10-8 М (пунктирная линия).
Рисунок 2. Данные, показывающие влияние различных концентраций ACh на сегмент подвздошной кишки морской свинки. Данные выражены как сила сокращения ткани в милливольтах.
Как показано на рисунке 1, существует положительная корреляция между концентрацией ACh и силой зарегистрированных сокращений. ACh вызывал небольшое сокращение в ткани, пока не была достигнута пороговая концентрация 4 * 10-6M. От 4 * 10-9M до 1,6 * 10-8M было мало различий в силе сокращений. Тем не менее, произошло резкое увеличение силы сокращений ткани между 1,6 * 10-8М и 6,4 * 10-8М. Максимальный ответ был зарегистрирован при концентрации ACh 2,56 * 10-7M. При более высоких концентрациях АЧ на фиг.1 показано уменьшение силы сокращений. ACh дал значение pEC50, равное 7,4, и на рисунке 2 показано, что он дал значение Emax, равное 353 мВ.
Обсуждение
Вот некоторые недостатки экспериментального дизайна. Размер выборки небольшой, поэтому данные подвержены влиянию внешних значений. Однако это можно решить, повторив эксперимент с большим количеством морских свинок. Результаты аналогичны результатам, полученным в предыдущих исследованиях. Согласно исследованию Ringdahl (1986) pEC50 ACh, действующего на подвздошную кишку морской свинки, составляет 7,44.
Результаты согласуются с тем, что ожидалось, поскольку существует положительная корреляция между концентрацией АЧ и силой зарегистрированных сокращений мышц. ACh, возможно, первоначально не вызывал ответ, поскольку не было достаточно высокой концентрации, чтобы связываться с мускариновым рецептором ацетилхолина и генерировать потенциал действия. Небольшое увеличение ответа могло быть результатом того, что рецепторы на некоторых клетках гладких мышц связывались с достаточным количеством ACh, чтобы генерировать потенциал действия, заставляющий мышцу сокращаться. При высоких концентрациях ACh ACh может связываться с рецепторами на большинстве клеток гладких мышц, что приводит к большой реакции. Падение максимального ответа может быть результатом десенсибилизации рецепторов, но это также может быть связано с ошибкой эксперимента.
Мужчины очень долго правили в индустрии фитнеса. Не удивительно, что женщины в равной конкуренции соревнуются с мужчинами в индустрии фитнеса. Они также ищут идеальное тело,
Есть несколько разных циклов, вокруг которых вращается Земля. Некоторые из циклов были затронуты катастрофой Фукусима-Дайхатсу. Завод в Фукусиме пострадал от землетрясения силой 9,0 балла. Растения,
Этот эксперимент проводится для наблюдения за развитием эмбрионов перепелов в течение нескольких дней. Эмбрион перепела обычно развивается и выводится через 20-21 день. Мы провели эксперимент