Сочинение на тему Процесс выращивания клеток
- Опубликовано: 23.06.2020
- Предмет: Наука
- Темы: Биология, клетка, микробиология
Введение
Ключевыми факторами при выращивании клеток являются точность, быстрая работа и поддержание стерильной среды. Использование шкафа биологической безопасности или капюшона – это один из способов обеспечить отфильтрованный воздух и чистое рабочее место. Воздух забирается в капот, фильтруется и затем попадает в рабочее пространство. Перед помещением какого-либо оборудования в шкаф биологической безопасности важно стерилизовать все 70% этанолом. Это включает в себя пипетки, центрифужные пробирки, колбы и перчатки каждый раз, когда они выходят и снова входят в капот.
Подготовка среды перед ее поступлением в колпак и использование среды в капоте – другие важные аспекты успешного культивирования клеток. В этом конкретном упражнении мы использовали базовую среду и фетальную бычью сыворотку. Сыворотки обеспечивают клетки необходимыми питательными веществами, чтобы они могли правильно расти. Некоторые важные примечания, касающиеся сывороток, заключаются в том, что они не используются для каждой клеточной линии, варьируются от партии к партии и, следовательно, не могут иметь надлежащих инспекций контроля качества на них. При хранении сыворотки следует защищать от света и хранить при температуре около -20 ° C вместе с другими средами. При извлечении таких жидкостей из соответствующих центрифужных пробирок или колб, не устанавливайте крышки и всегда держите их лицевой стороной вниз, чтобы избежать загрязнения.
Целью использования шкафа биологической безопасности при культивировании клеток является поддержание стерильности для обеспечения благоприятного результата. Всякий раз, когда капот может быть загрязнен, важно удалить его и повторно стерилизовать. Если носитель, сыворотка или клетки загрязнились, важно удалить их и не использовать их в дальнейшем.
Материалы и методы
Материалы70% этанолБаза Медиа. Фетальная бычья сыворотка (FBS) P-1000. Микропипетка 15 мл центрифужная пробирка. Стойка для центрифуг. Пипетка для помощиСерологическая пипетка (10 мл). Т25 Flask24 хорошо тарелка. Включите поток воздуха в капоте, чтобы начать фильтрацию воздуха. Протрите рабочую зону, все материалы и перчатки 70% этанолом. Подготовьте 10 мл питательной среды в центрифужной пробирке на 15 мл. Используйте пипетку и 10 мл серологической пипетки для переноса 9 мл основного носителя. Используйте микропипетку P-1000 для переноса 1 мл FBS
- Используя 10 мл серологической пипетки, перенесите 6 мл питательной среды в колбу Т25
- С помощью микропипетки перенесите 2 мл культуральной среды из центрифужной пробирки в первые две лунки на 24-луночный планшет.
- Перенесите 500 мкл из каждой лунки во второй ряд лунок и добавьте 1 мл среды.
Результаты и обсуждение
В этом лабораторном упражнении нам было поручено углубить наши знания о процедурах безопасности и надлежащих лабораторных методах. Было подчеркнуто, чтобы всегда стерилизовать все, потому что загрязнение может испортить ваши результаты. Вы должны стерилизовать рабочее пространство, все материалы, идущие под капюшоном, и ваши перчатки каждый раз, когда они выходят, и снова входить в капюшон. Наряду с практикой нашей техники пипетирования, эта лаборатория позволила нам стать более опытными, более точными и быстрыми при подготовке питательных сред под шкафом биологической безопасности.
Заключение
Цель этой лаборатории состояла в том, чтобы получить больше знаний о безопасности и улучшить наши методы при пипетировании и подготовке среды, находясь в вытяжном шкафу. Подготовив питательную среду, состоящую из 9 мл базовой среды и 1 мл FBS, мы смогли достичь вышеупомянутых целей.
Роль сыворотки заключается в обеспечении клеток необходимыми питательными веществами, чтобы они могли правильно расти. При хранении сыворотки следует защищать от света и хранить при температуре около -20 ° C. Крышка флакона с носителем никогда не должна касаться рабочей поверхности, ее следует держать лицом вниз и избегать прикосновения к чему-либо, что считается нестерильным. Подготовленная культуральная среда должна использоваться в течение примерно трех недель, но не более шести недель. Чтобы использовать 100 мл из 500 мл среды, используйте серологическую пипетку объемом 50 или 25 мл, если она имеется. Избегайте выливания носителя из бутылки из-за возможного загрязнения вокруг обода и следующей области трубки.
Лить только в случае крайней необходимости или в случае абсолютного предотвращения загрязнения. (Если известно, что все стерильно). Если стерильная пипетка касается внешней стороны флакона с носителем, не забудьте выбросить наконечник или серологическую пипетку во избежание загрязнения. Погружение всего наконечника в бутылку с носителем может привести к загрязнению носителя, что, возможно, приведет к искажению результата или даже к уничтожению культивируемых клеток. Если на рабочую поверхность капает стерильная среда, ее следует немедленно очистить и уведомить лабораторного инструктора.
Колбы T25 следует переносить горизонтально со стерильной перчаткой, удерживающей их, чтобы избежать любых загрязнений. Разные линии клеток имеют разные предпочтения и потребности; следовательно, вентилируемый колпачок обеспечивает газообмен для клеток, которые в этом нуждаются, тогда как невентилируемый колпачок предотвращает газообмен для тех, кто в этом не нуждается. Среда не должна высыхать с культуральной чашки в инкубаторе, потому что влажность должна оставаться на уровне около 95% из-за поддона для воды в инкубаторе.
Мужчины очень долго правили в индустрии фитнеса. Не удивительно, что женщины в равной конкуренции соревнуются с мужчинами в индустрии фитнеса. Они также ищут идеальное тело,
Есть несколько разных циклов, вокруг которых вращается Земля. Некоторые из циклов были затронуты катастрофой Фукусима-Дайхатсу. Завод в Фукусиме пострадал от землетрясения силой 9,0 балла. Растения,
Этот эксперимент проводится для наблюдения за развитием эмбрионов перепелов в течение нескольких дней. Эмбрион перепела обычно развивается и выводится через 20-21 день. Мы провели эксперимент