Аннотация:
Основной целью этого эксперимента было преобразование ДНК, обнаруженной в бактериях. Плазмида была использована на кишечной палочке и с использованием теплового шока была унаследована бактериями, которые заставили кишечную палочку стать устойчивой к ампициллину. Также в плазмиде был GFP, который подтвердил гипотезу, светясь зеленым в УФ-свете. Предсказанный результат подтвердился и дает представление о том, что может ожидать будущее медицины.
Введение:
Трансформация ДНК на бактериях потребует изменения их генов. Использование pGLO в этом эксперименте позволило трансформировать ДНК Escherichia coli (E.coli). В этой плазмиде три гена: ген araC, ген зеленого флуоресцентного белка (GFP) и ген bla. Ген ara C является бифункциональным регулятором, который транскрипирует мРНК araC, которая трансформируется в белки araC, которые действуют как депрессор или промотор для GFP. GFP также выполняет транскрипцию для получения мРНК GFP, которая транслируется для получения GFP, который светится зеленым в ультрафиолетовом свете (УФ-свет). Последний ген является геном bla, который дает бактериям устойчивость к ампициллину. E. Coli использовался в этом эксперименте, потому что он находится внутри нашего тела, поэтому он не очень вреден для человека и быстро растет. Трансформация бактерий – это процесс, посредством которого чужеродная ДНК вводится в клетку (addgene.org). Используя плазмиды, линейную или кольцевую двухцепочечную ДНК, которая способна реплицироваться независимо от хромосомной ДНК (biology-online.org), трансформация может происходить. Используя тепловой шок, большинство бактерий принимает чужеродную ДНК и внедряет ее в свою собственную ДНК. В этом эксперименте E.coli трансформировался, чтобы стать устойчивым к антибиотику ампициллину и экспрессировал GFP. Использование теплового шока и pGLO превратит кишечную палочку в резистентную к ампициллину при светящемся зеленом цвете. Эти результаты могут помочь трансформировать гены ДНК человека и обеспечить устойчивость к опасным для жизни заболеваниям, таким как СПИД.
Методы и материалы:
- Две микропробирки были помечены + pGLO, а другая – pGLO.
- Используя стерильную пипетку для переноса, 250 мкл раствора для трансформации (CaCl2) переносили в каждую пробирку.
- Пробирки помещали в ведро со льдом на 3 минуты.
- Отдельную колонию E.coli помещали в раствор для трансформации (CaCl2) в пробирке, помеченный + pGLO, стерильной петлей и вращали до тех пор, пока колония полностью не оказалась в растворе для трансформации. То же самое было сделано для пробирки с надписью -pGLO. После этого обе пробирки поместили обратно в ведро со льдом еще на 3 минуты.
- Новая стерильная петля использовалась для переноса плазмидной ДНК pGLO в пробирку с меткой + pGLO, а не –pGLO.
- Пробирки затем возвращали в ведро со льдом на 10 минут. Пока пробирки находились во льду, чашки с агаром собирали и маркировали типом чашки и названием группы.
- После 10 минут пробирок, находящихся во льду, их обоих переносили в водяную баню, установленную при 42 ° C, на 50 секунд. Через 50 секунд пробирки снова помещали в ведерко со льдом на 2 минуты.
- Извлекая обе пробирки, стерильную пипетку использовали для пипетирования 250 мкл питательного бульона LB в пробирку, а затем хорошо перемешивали. Та же самая процедура была проделана с другой пробиркой с использованием новой стерильной пипетки. После того как оба были смешаны, их инкубировали при комнатной температуре в течение 20 минут.
Независимая переменная: содержит ли пластина pGLO
Зависимая переменная: скорость роста
Контролируемые переменные:
- Количество питательного вещества LB
- Количество решения преобразования
- Количество отстранений
- Время в ведерке со льдом и комнатная температура
- Температура водяной бани и холодильника
Положительный контроль: -pGLO, LB
Отрицательный контроль: -pGLO, LB, AMP
Эти контроли были выбраны потому, что даже без плазмиды на пластинке с надписью «-pGLO, LB» должен был быть рост, потому что единственное, что было добавлено в пластинку, это питательные вещества для бактерий. Пластинка без плазмиды, питательного вещества LB и ампициллина является отрицательным контролем, потому что ампициллин должен убивать все бактерии на пластине.
Обсуждение
Гипотеза была поддержана в этом эксперименте. На пластине, помеченной «+ pGLO, LB, AMP, ARA», наблюдался рост, когда обычно ампициллин убивал бактерии, как показано на пластине, помеченной «-pGLO, LB, AMP». Кроме того, глядя на фигуру УФ-света, та же пластинка была в состоянии светиться как причина наследования GFP и присутствия в присутствии арабинозы. На пластине с надписью «-pGLO, LB» должен быть бактериальный рост, но его нет. Это может быть возможной ошибкой, если не перенести достаточно большую колонию кишечной палочки. На пластине, помеченной «+ pGLO, LB, ARA», должны быть светящиеся более отчетливые колонии, однако на фигуре ультрафиолета светится только пленка. Это может быть причиной слишком сильного давления на колонию при распространении кишечной палочки на чашку. Возможность генетически модифицировать ДНК может помочь исследователям в области медицины разработать клетки, которые будут устойчивы к любым вредным явлениям, таким как грипп или ВИЧ. В заключение, изменение ДНК бактерий возможно и настолько просто, что первокурсники в колледже могут сделать это.
Генитальный туберкулез – причина бесплодия среди женщин Вполне вероятно, что у каждого из нас был член семьи или знакомый, пострадавший от туберкулеза. Туберкулез является серьезной
Многие дети в отделении интенсивной терапии новорожденных сталкиваются со многими проблемами со здоровьем, которые сопряжены с рискованными и болезненными процедурами в повседневной жизни в больнице.
В это исследование были включены 30 пациентов с колоректальным раком и раком молочной железы, которые использовали капецитабин. Пациентов попросили принести любое лекарство, оставленное во время