Сочинение на тему Биохимические лабораторные методы, систематические и аналитические методы

Колориметр (или фотоэлектрический колориметр) – это инструмент, используемый для измерения цветных веществ. Этот аппарат работает в наблюдаемом диапазоне (400-800 нм) электромагнитного спектра света. Функционирование колориметра основано на принципе закона Бера-Ламберта.

Колориметр, как правило, содержит источник света, держатель образца фильтра и детектор с дисплеем (счетчик или цифровой). Струнная лампа обычно служит источником света. Фильтры пропускают минутный диапазон длины волны в виде падающего света.

Спектрофотометр в первую очередь отличается от колориметра тем, что покрывает ультрафиолетовую область (200-400 нм) электромагнитного спектра. Кроме того, спектрофотометр более сложен с многочисленными дополнительными устройствами, которые в конечном итоге повышают чувствительность его работы в несколько раз по сравнению с колориметром.

Для измерений можно использовать точно выбранную длину волны (234 нм или 610 нм) как в ультрафиолетовом, так и в видимом диапазоне. Вместо стеклянных кювет (в колориметре) в спектрофотометре используются кварцевые элементы. Спектрофотометр имеет аналогичные основные части, описанные для колориметра

Ультрацентрифугирование является незаменимым инструментом для выделения субклеточных органелл, белков и нуклеиновых кислот. этот метод также используется для определения молекулярной массы макромолекул. Скорость, с которой происходит седиментация при ультрацентрифугировании, основывается, главным образом, на массе и форме частиц или макромолекул (т.е. на молекулярной массе). Это выражается в терминах коэффициентов седиментации).

Центрифугирование – это использование центробежных сил, генерируемых в вращающемся роторе, для разделения биологических частиц, оно включает клетки, вирусы, субклеточные органеллы, макромолекулы (главным образом белки и нуклеиновые кислоты) и макромолекулярные комплексы (такие как рибонуклеопротеины и липопротеины) , Тремя основными процедурами разделения являются дифференциальное гранулирование, скоростное зональное центрифугирование и изопикническое центрифугирование. Первые два метода разделяют частицы преимущественно на основе объема, а изопикническое центрифугирование разделяет частицы на основе их плотности. Выбор метода центрифугирования, основанный на природе частиц и часто выше одного метода разделения, является обязательным, например, мембранное фракционирование часто включает в себя сначала получение обогащенной фракции из гомогената клеток путем дифференциального гранулирования с последующим изопикническим

Спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ЯМР) – это метод аналитической химии, используемый в контроле качества и исследованиях для определения содержания и чистоты теста с его молекулярной структурой. Центрифугирование для получения очищенных фракций.

Масс-спектрометрия – это полезный аналитический метод, используемый для количественной оценки известных материалов, для идентификации неопознанных соединений в образце и для выяснения структуры и химических свойств разнородных молекул. Весь процесс включает превращение образца в газообразные ионы, включая или не включающий фрагментацию, которые затем характеризуются отношением массы к заряду (m / z) и относительными содержаниями.

Этот метод в основном изучает влияние энергии ионизации на молекулы. Он основан на химических реакциях в газовой фазе, когда молекулы образца потребляются во время образования ионных и нейтральных частиц.

 <Р> Принцип:

Начальным этапом масс-спектрометрического анализа соединений является получение газофазных ионов соединения, в основном путем электронной ионизации. Этот молекулярный ион подвергается фрагментации. Каждый первичный продукт-ион, полученный из молекулярного иона, в свою очередь подвергается фрагментации и так далее. Ионы разделяются в масс-спектрометре в соответствии с их отношением массы к заряду и детектируются пропорционально их большому количеству. Таким образом, формируется масс-спектр молекулы. Он отображает результат в виде графика зависимости содержания ионов от массы к заряду. Ионы дают информацию о природе и структуре молекулы-предшественника. В спектре чистого соединения молекулярный ион, если он присутствует, появляется при самом высоком значении m / z (за которым следуют ионы, содержащие более тяжелые изотопы) и дает молекулярную массу соединения.

ИФА зависит от иммунохимических принципов действия антиген-антитело

  
1. Антитело против определяемого белка установлено на инертном твердом веществе, например полистироле.

  

2. Биологический образец содержит белок, который, по оценкам, полезен на поверхности, покрытой антителами.

  

3. Комплекс белок-антитело затем реагирует со вторым антителом, специфичным для белка, с которым ковалентно связан фермент. Эти ферменты должны легко анализироваться и производить предпочтительно окрашенные продукты. Обычно используются пероксидаза, амилаза и щелочная фосфатаза.

  

4. После промывки несвязанного связанного с антителом фермента анализируется фермент, связанный со вторым комплексом антител.

  

5. Активность фермента определяется его действием на субстрат с образованием продукта (обычно окрашенного). Это связано с оценкой концентрации белка.

 
 

Применение:

 

ИФА широко используется для определения небольших количеств белков (гормонов, антигенов, антител) и других биологических веществ. Наиболее часто используемый тест на беременность для выявления человеческого хорионического гонадотропина (ХГЧ) в моче основан на ИФА. С помощью этого теста беременность может быть обнаружена в течение нескольких дней после зачатия. ИФА также полезен для диагностики СПИДа.