Брэдфордский анализ – это форма колориметрического и спектроскопического анализа, разработанная для определения концентрации белка; в водном растворе. Произведенный Мэрион Брэдфорд в 1976 году, он был новшеством своего времени благодаря различным факторам, включая его простоту, быстрые результаты, воспроизводимость и высокую чувствительность 0-0,01 мг (Martina and Vojtech, 2015); по сравнению с другими анализами, такими как метод Лоури и Биурета, который ему удался.
Реагент Брэдфорда состоит из смеси красителя Кумасси бриллиантовый синий G-250, растворенного в смеси фосфорной кислоты и метанола. Анализ основан на изменении поглощения красителя Кумасси бриллиантовый синий G-250, в котором в кислых условиях красная форма красителя превращается в его синюю форму, поскольку она связывается с анализируемым белком.
Связывание между красителем и белком происходит в результате взаимодействия между основными аминокислотными остатками на белках и неподеленной парой электронов от красителя. Это приводит к искажению нативной формы белка и обнажению некоторых его гидрофобных остатков. Эти гидрофобные остатки связываются с неполярными областями красителя, приводя к ван-дер-ваальсовым силам. Кроме того, эти силы Ван-дер-Ваальса приводят к расположению положительных аминогрупп ближе к отрицательному заряду красителя, что позволяет белково-красному комплексу усиливаться за счет ионного связывания. Это приводит к окраске красителя от красного до синего, который мы можем лучше всего определить при длине волны света 595 нм.
В целом это показывает, что нестабильность красителя Кумасси бриллиантовый синий G-250 стабилизируется путем связывания с белком. Следовательно, когда содержание белка увеличивается, образуется больше комплексов белок-краситель, и происходит большее окрашивание, которое может быть; таким образом, количество комплекса, присутствующего в растворе, является мерой концентрации белка и может быть оценено с использованием показаний оптической плотности.
Поскольку существует прямая связь между поглощением раствора и концентрацией растворимого белка. Это известно по закону Бера-Ламберта, согласно которому концентрация растворенного вещества пропорциональна оптической плотности.
Цели эксперимента были следующими:
- Создать серию разведений стандартного белка с бычьим сывороточным альбумином (BSA) и провести анализ белка Брэдфорда на этих известных концентрациях белка.
- Использовать предыдущие концентрации для создания градуировочного графика, измеренного по поглощению, и использовать этот график для определения концентрации белка в двух образцах клеточного экстракта.
- В целом, эксперимент проводился для определения концентрации белка в двух клеточных экстрактах с неизвестной концентрацией белка с использованием анализа белка Брэдфорда.
Мужчины очень долго правили в индустрии фитнеса. Не удивительно, что женщины в равной конкуренции соревнуются с мужчинами в индустрии фитнеса. Они также ищут идеальное тело,
Есть несколько разных циклов, вокруг которых вращается Земля. Некоторые из циклов были затронуты катастрофой Фукусима-Дайхатсу. Завод в Фукусиме пострадал от землетрясения силой 9,0 балла. Растения,
Этот эксперимент проводится для наблюдения за развитием эмбрионов перепелов в течение нескольких дней. Эмбрион перепела обычно развивается и выводится через 20-21 день. Мы провели эксперимент