Сочинение на тему Процесс извлечения ядерного материала
- Опубликовано: 27.07.2020
- Предмет: Наука
- Темы: генетика, Генная инженерия, ДНК
Кибера является крупнейшим неформальным поселением в Найроби, Кении и одним из крупнейших в Африке и мире. Он расположен в 7 км к юго-западу от Найроби и в нем проживает около миллиона человек и несколько видов животных. Условия в Кибере чрезвычайно плохие и сильно загрязнены отходами и мусором людей и животных.
Образцы стула были собраны в стерильные чашки и выдерживались при 4 ° С до испытания. Все образцы стула для исследования хранились при -80oC после приема в лабораториях KEMRI в Найроби.
Извлечение ядерного материала
180 – 220 мг или 200 мкл жидких образцов кала извлекали с использованием модифицированной процедуры QIAamp Fast Stool Mini Kit, где они проходили процесс приготовления лизата, который включал этап механического разрушения (взбивание шариков), удаление ингибиторов и элюцию нуклеинового материала. используя спиновые столбцы. Лизат переносили в центрифуги и центрифугировали. Колонки были дважды промыты в соответствии с инструкциями производителя; центрифугируют при 14000Xg в течение 1 минуты и элюируют 100 мкл общей нуклеиновой кислоты (TNA) (Liu et al., 2013).
<Р> ОТ-ПЦР
Образцы были проверены на HEV методом RT-PCR. Вкратце, готовили 25 мкл реакционных смесей, содержащих: 12,5 мкл 2-кратного буфера для одноэтапной RT-PCR мастер-анализа Taq man, 1 мкл 40-кратной смеси мультискрибов и ингибиторов РНКазы, 1 мкМ прямого праймера, 1 мкМ обратного праймера, 5,75 мкл воды молекулярного качества и 5 мкл воды очищенная РНК. (Реакции инкубировали при 50 ° С в течение 30 мин, затем при 94 ° С в течение 3 мин. Термоциклирование проводили в течение 45 циклов при 94 ° С в течение 30 с, 42 ° С в течение 30 с и 72 ° С в течение 30 с в течение модель термоциклера 7500F (Applied Biosystems). Пороговые значения CT цикла ≤30 были рассмотрены для секвенирования.
Синтез и амплификация кДНК
Для получения ампликонов для секвенирования использовали стандартный одностадийный анализ синтеза и амплификации кДНК по внутреннему протоколу следующим образом:
Мастер-микс, содержащий 2,0 мкл РНКазы без воды; 16 мкл 2X реакционной смеси; 1 мкл из 20 пмолей / мкл прямого и обратного праймеров (292 и 222 таблицы 1); 1 мкл смеси SuperScript III RT / Platinum Taq и 4 мкл матрицы РНК. Реакционную смесь инкубировали при 50 ° С в течение 45 мин; 94 ° С в течение 3 минут, затем проводили термоциклирование в течение 40 циклов при 94 ° С в течение 30 с; 42 ° C в течение 1 минуты и 60 ° C в течение 2 минут в термоциклере модели 9700 (Applied Biosystems, Foster City, CA) (Oberste et al., 2006). За термоциклированием следовало окончательное удлинение при 60 ° С в течение 10 мин. Продукты реакции анализировали с помощью электрофореза в 1% агарозном геле и окрашивали 0,5 мг / мл этидийбромида.
Использование редактирования и изменения генома для разработки и конструирования атрибутов будущих детей было поддержано и одобрено Советом по биоэтике Наффилда; В докладе говорится, что морально
РНК-интерференция (RNAi) – один из самых захватывающих и революционных новых подходов к терапии, который привлек значительное внимание в течение последних нескольких десятилетий. Было обнаружено, что
В современном мире влияние, которое наука может оказать на жизнь, как мы знаем, остается очень важным. Много исследований проводится в отношении риска вирусных инфекций среди