Чтобы избежать ошибок из-за неопытности, эксперименты по проверке должны проводиться опытным аналитиком. А также аналитик должен очень хорошо разбираться в технике и работе инструмента. Технические характеристики прибора проверяются с использованием общих химических стандартов, прежде чем прибор будет использован для валидации метода. Удовлетворительные результаты могут быть получены для метода только с оборудованием, которое работает хорошо. Особое внимание следует уделить характеристикам оборудования, которые имеют решающее значение для метода. Например, если предел обнаружения является критическим для конкретного метода, необходимо проверить технические характеристики прибора для базового шума и, для некоторых детекторов, реакцию на определенные соединения.
Любые химические вещества, такие как реагенты и эталонные стандарты, используемые для определения критических параметров валидации, должны быть доступны в достаточных количествах, точно идентифицированы, достаточно стабильны и проверены на точный состав и чистоту. Любые другие материалы и расходные материалы, например хроматографические колонки, должны быть новыми и иметь квалификацию, отвечающую критериям эффективности колонки. Это гарантирует, что один набор расходных материалов может быть использован для большинства экспериментов. Когда операторы достаточно хорошо знакомы с техникой и оборудованием, это позволит им легче выявлять и диагностировать непредвиденные проблемы и более эффективно выполнять весь процесс.
Если информация о рабочих характеристиках метода мала или отсутствует, рекомендуется доказать пригодность метода для предполагаемого использования в первоначальных экспериментах. Эти исследования должны включать приблизительную точность, рабочий диапазон и пределы обнаружения. Если предварительные данные проверки кажутся неуместными, сам метод, оборудование, методика анализа или допустимые пределы должны быть изменены. Поэтому разработка и валидация методов – это итеративный процесс. Например, в жидкостной хроматографии селективность достигается за счет выбора состава подвижной фазы. Для количественных измерений коэффициент разрешения между двумя пиками должен составлять 2,5 или выше. Если это значение не достигается, состав подвижной фазы нуждается в дальнейшей оптимизации. Влияние рабочих параметров на производительность метода будет оцениваться на этом этапе, если это не было сделано во время разработки и оптимизации метода.
Официальных руководств по правильной последовательности проверочных экспериментов не существует, и оптимальная последовательность будет зависеть от самого метода. Для жидкостного хроматографического метода при проверке оказалась полезной следующая последовательность: селективность стандартов (оптимизация разделения и обнаружения стандартных смесей, если селективность недостаточна) линейность, предел количественного определения, предел обнаружения, диапазон повторяемость (кратковременная точность ) времени удерживания и площадей пиков. Промежуточная точность. Селективность с реальными образцами. Достоверность / точность при различных концентрациях. Устойчивость (межлабораторные исследования). Более длительные эксперименты, такие как точность и прочность, обычно включаются в конец. Некоторые параметры, перечисленные в (2) – (6), могут быть измерены в комбинированных экспериментах.
Например, когда точность площадей пиков измеряется во всем диапазоне концентраций, данные также могут использоваться для проверки линейности. Во время валидации метода должны быть определены параметры, допустимые пределы и частота текущих тестов на пригодность системы или контроля качества. В то же время должны быть определены критерии, указывающие, когда метод и система находятся вне статистического контроля. Следовательно, цель состоит в том, чтобы оптимизировать эти эксперименты с минимальным количеством контрольных анализов, метод и полная аналитическая система обеспечат долгосрочные результаты для достижения целей, определенных в области применения метода. После того, как метод был разработан и утвержден, должен быть подготовлен отчет о валидации, включающий цель и область применения метода (применимость, тип), краткое изложение методологии, типа соединений и матрицы, всех химикатов, реагентов, эталонных стандартов, образцов контроля качества с чистотой. , класс, источник или подробные инструкции по их подготовке, процедуры проверки качества используемых стандартов и химических веществ, меры предосторожности, план и процедура внедрения метода от лаборатории разработки метода до рутинного анализа, параметры метода, критические параметры, взятые из испытаний на устойчивость перечень оборудования и его функциональные и эксплуатационные требования, например размеры ячейки, базовый шум и диапазон температуры колонки.
Для сложного оборудования может быть полезна картинка или принципиальная схема, подробные условия проведения экспериментов, включая подготовку образцов. Отчет должен быть достаточно подробным, чтобы гарантировать, что он может быть воспроизведен компетентным техником с сопоставимым оборудованием, статистическими процедурами и репрезентативными расчетами, процедурами контроля качества в рутинных анализах, например, тестах пригодности системы, репрезентативных графиках, например, хроматограммах, спектрах и калибровке. кривые, данные о допустимых пределах приемлемости метода, ожидаемая неопределенность результатов измерений, критерии для повторной проверки, лицо (лица), которое разработало и утвердило метод, ссылки, резюме и выводы, утверждение с именами, названиями, датой и подписью лиц, ответственных за рассмотрение и утверждение процедуры аналитического испытания.